Protocol for high-fidelity Fixed Microtubule and ER STORM Sample
Protocol for high-fidelity Fixed Microtubule and ER STORM Sample
1, 高保真多细胞器固定，使用Sunbloss®️高保真固定液-多细胞器37 ℃固定细胞 10min；
2, 使用2ml Sunbloss®️超纯制样PBS简短的清洗细胞 3 次；
3, 压制背景荧光，使用2ml配置好的 Sunbloss®️自发荧光抑制剂，在室温下孵育样本 7min，使用侧摆摇床辅助交换液体；
4, 使用2ml Sunbloss®️超纯制样PBS简短的清洗细胞 3 次；
5, 封闭抗体非特异性结合位点，使用 50ul 配置好的Sunbloss®️封闭打孔液， 同时使用 Sunbloss®️制样伴侣-贴壁样本辅助样本的孵育，室温下孵育细胞 30 min；
6, 使用 Sunbloss®️制样伴侣-贴壁样本辅助一抗孵育，保持湿润环境，室温孵育 1 小时。一抗选择 beta-tubulin、calnexin rabbit；
7, 使用 2ml Sunbloss®️超纯制样PBS清洗一抗，5min 一次，清洗3次，使用侧摆摇床辅助交换液体；
8, 抵御非特异性荧光染料结合，使用25ul Sunbloss®️荧光净化增强液，同时使用 Sunbloss®️制样伴侣-贴壁样本辅助样本的孵育，室温孵育样本 30min；
9, 使用 Sunbloss®️制样伴侣-贴壁样本辅助二抗孵育。保持湿润环境，室温孵育 1 小时。二抗选择 Cy5 goat-anti-mouse IgG、Alexa555 goat-anti-rabbit IgG；
10, 使用 2ml Sunbloss®️超纯制样PBS清洗二抗，5min 一次，清洗3次，使用侧摆摇床辅助交换液体；
11, 使用 Sunbloss®️超分辨光镜级PFA-16%， 预制成 4%浓度，取 500ul 浸没样品进行后固定，时间10min。
12, 在成像时，使用Sunbloss® SMLM Imaging STORM Buffer，进行 STORM 成像。
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