Protocol for high-fidelity Fixed Multiple Organell Confocal Sample
Protocol for high-fidelity Fixed Multiple Organell Confocal Sample
1, 追求高保真的细胞培养，应用 Sunbloss®细胞高活力培养基 AB 液实现高活力和健康度的细胞培养，并在种成像子细胞前使用 Sunbloss®细胞贴壁辅助液获得充分贴壁延展的细胞；
2, 高保真多细胞器固定，使用Sunbloss®️高保真固定液-多细胞器37 ℃固定细胞 10min；
3, 使用2ml Sunbloss®️超纯制样PBS简短的清洗细胞 3 次；
4, 压制背景荧光，使用2ml配置好的 Sunbloss®️自发荧光抑制剂，在室温下孵育样本 7min，使用侧摆摇床辅助交换液体；
5, 使用2ml Sunbloss®️超纯制样PBS简短的清洗细胞 3 次；
6, 封闭抗体非特异性结合位点，使用 50ul 配置好的Sunbloss®️封闭打孔液， 同时使用 Sunbloss®️制样伴侣-贴壁样本辅助样本的孵育，室温下孵育细胞 30 min；
7, 使用 Sunbloss®️制样伴侣-贴壁样本辅助一抗孵育，保持湿润环境，室温孵育 1 小时。一抗选择 beta-tubulin E7 mouse、tom20 rabbit；
8, 使用 2ml Sunbloss®️超纯制样PBS清洗一抗，5min 一次，清洗3次，使用侧摆摇床辅助交换液体；
9, 抵御非特异性荧光染料结合，使用25ul Sunbloss®️荧光净化增强液，同时使用 Sunbloss®️制样伴侣-贴壁样本辅助样本的孵育，室温孵育样本 30min；
10, 使用 Sunbloss®️制样伴侣-贴壁样本辅助二抗孵育 和染料。保持湿润环境，室温孵育 1 小时。二抗 和染料选择Alexa647-goat-anti-mouse、Alexa555-goat-anti-rabbit、acti-stain488、hoechest。
11, 使用 2ml Sunbloss®️超纯制样PBS清洗二抗，5min 一次，清洗3次，使用侧摆摇床辅助交换液体；
12, 使用 Sunbloss®️超分辨光镜级PFA-16%， 预制成 4%浓度，取 500ul 浸没样品进行后固定，时间10min。
13, 使用prolong封片剂进行封片。如果不封片，在成像时，选择使用Sunbloss® Antifade成像缓冲液进行高质量 confocal成像。
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