Nirvana 1 Pro max Immunolabeling Kit 涅槃 1pro Max 标记试剂盒

Nirvana 1 Pro max Immunolabeling Kit 涅槃 1pro Max 标记试剂盒

Nirvana 1 Pro max Immunolabeling Kit

涅槃 1Pro Max 标记试剂盒

CAT：HX-NIP003

Product Specifications and Storage Methods

⚠️重要：多数试剂必须实验前新鲜配制，禁止预混长期存放；整套试剂盒建议 18 个月内用完，各单组分保质期参考对应单品说明书。Antifade 成像缓冲液仅用于固定细胞样本，预混后有效时长仅 1 h；活细胞成像请选用 Sunbloss® CytoShield 活细胞成像缓冲液。

1、产品功能

Nirvana 1 Pro max 涅槃 1pro 标记试剂盒，面向 STED、SIM、转盘共聚焦、3D Z‑stack 超分辨免疫荧光全流程制样，重点针对 STED 高功率激光带来的强光光毒性做成像端强化。完整覆盖：细胞培养载具→样本高保真固定→抑制内源自发荧光→封闭打孔通透→抗体孵育→STED 抗淬灭成像全套流程。

1. 高保真固定：同时保全线粒体、内质网、高尔基体、溶酶体、微管、微丝超微结构，降低固定造成的解聚、形变。

2. 自发荧光抑制：消除细胞内源与醛类固定剂引入的背景荧光，提升信噪比。

3. 封闭打孔一体化：一步完成封闭 + 膜通透，可全程沿用至一抗、二抗孵育，降低非特异结合，提高抗体胞内穿透效率。

4. 制样耗材套装：超分辨级 PFA 原料、超纯制样 PBS、玻底成像皿、制样伴侣，减少试剂选型，节约昂贵抗体用量。

5. STED 定向抗淬灭模块：提升荧光初始亮度，缓解 STED 强光漂白，延长采样帧数，改善 3D‑STED 不同 Z 深度信号均一性。

2、完整实验操作 Protocol（精简版，步骤清晰）

流程总览：细胞培养准备 → 样本高保真固定 → 自发荧光淬灭 → PBS 清洗 → 封闭打孔处理 → 一抗孵育 → 二抗孵育 → PBS 清洗 → Antifade 抗淬灭缓冲液现配 → STED / 超分辨上机成像

2.1 细胞准备

1. 使用试剂盒内Sunbloss® 玻底成像皿 HXCC003接种贴壁细胞；推荐最终汇合度50‑70%，细胞状态良好再开展制样。

2. 试剂预热：将Sunbloss® 超纯制样 PBS、HXSP004 多细胞器固定液全部 37℃预热。

2.2 高保真固定（HXSP004）

1. 沿皿侧壁加入预热超纯 PBS 润洗细胞 2 次，第二次尽量吸干，严禁干片。

2. 新鲜配制固定液：Multiple Organelle Types Fixation Solution I 500 μl + Solution II 200 μl + Multiple Organelle Types Buffer 500 μl，充分混匀。

3. 加入足量预混固定液完全浸没细胞；37℃恒温固定 10 min（培养箱 / 金属浴控温）。建议单次固定样本≤3 皿，避免延时降低固定效果。

4. 固定完成，使用 25℃超纯 PBS 润洗样本 3 次。

5. ✅必做检查：明场镜检，细胞明显皱缩、结构破坏样本直接废弃，不进入后续染色。

2.3 自发荧光抑制（HXSP007）

粉末极易吸水失效；工作浓度 1 mg/mL；配好后 1 min 内使用。

1. 取 5 mL 试剂盒超纯 PBS 置于 15 mL 离心管。

2. 吸取 1.5 mL 上述 PBS 加入一支 5 mg 粉末管，快速吹打溶解；全部吸回 15 mL 离心管混匀，得到 5 mL 工作液。

3. 成像小皿中加入≥2 mL 工作液完全浸没样本；侧摆摇床转速≤50，室温孵育 7 min。

4. 吸弃废液，超纯 PBS 充分清洗样本 3 次。

2.4 封闭打孔（HXSP010，搭配制样伴侣 HXSP008 节约抗体）

1. 新鲜配制封闭打孔工作液：0.5 mL Solution I + 50 μL Solution II，加入等体积 PBS 混匀融化。

2. PBS 清洗样本 3 次，吸尽废液。

3. 玻底皿滴加25 μL 封闭打孔工作液；使用镊子取Sunbloss® 制样伴侣‑贴壁样本 HXSP008覆盖样本表面，形成薄层孵育体系。无制样伴侣：20 mm 玻底皿≥250 μL；细胞爬片≥1 mL，必须完全浸没。

4. 室温孵育 30 min。不要吸弃工作液，直接用来稀释一抗，全程沿用该体系完成一抗、二抗孵育。工作液 4℃最多存放 3 天，建议现配现用。

2.5 一抗、二抗孵育

1. 用当前封闭打孔工作液稀释一抗；按实验条件孵育；孵育结束超纯 PBS 充分洗涤。

2. 继续用封闭打孔工作液稀释二抗，避光孵育；孵育结束超纯 PBS 充分洗涤样本。

2.6 STED / 超分辨成像前‑抗淬灭缓冲液现配（HXIE003，STED 关键步骤）

1. 上机前即时配制，禁止提前预混存放：Buffer I 2000 μL + Buffer II 20 μL，轻柔混匀，避免气泡。

2. 超纯 PBS 清洗样本 2 次，彻底吸除 PBS。

3. 加入预混好的 Antifade 成像缓冲液，液体完全覆盖细胞；1 h 内完成成像，尽量减少和空气接触。

STED 提示：大 Z‑stack 多层扫描，控制在预混缓冲液 1 小时时效内完成；虽有抗淬灭保护，仍需合理控制激光功率与扫描循环。

2.7 成像结束后样本回收

1. 吸除 Antifade 成像缓冲液；PBS 快洗 3 遍，纯水快洗 3 遍。

2. 按需保存样本或开展后续其他染色。

3、关键点（精简）

1. 绝大多数工作液必须实验前新鲜配制；Antifade 预混后仅限 1 h 有效，超时直接失效。

2. 全程严防细胞干片；换液沿皿侧壁加液，不可直冲细胞，防止脱落、形变。

3. 固定后明场镜检是质控节点，皱缩破损样本停止后续操作。

4. HXSP007 自发荧光抑制剂粉末极易吸潮，必须干燥储存；配完 1 分钟内使用。

5. 制样伴侣可以大幅降低抗体消耗，强烈建议用于一抗二抗孵育步骤。

6. 试剂盒中 HXSP012（16% 超分辨 PFA‑16%）为原料试剂，本套完整流程优先使用 HXSP004 成套高保真固定液；可按需用于后固定或者其他自定义实验。

4、产品优势

🔹STED 全链路定向优化：从高保真固定、背景抑制到 STED 专用抗淬灭缓冲液完整链路；解决 STED 高功率耗尽激光光毒性、荧光快速淬灭痛点；荧光亮度提升 2‑3 倍，延长 STED 有效采样帧数，优化 3D‑STED Z 轴多层信号均一性。

🔹一站式全套超分辨免疫荧光制样试剂盒：整合固定、自发荧光抑制、封闭打孔、PFA 原料、超纯 PBS、成像耗材、STED 抗淬灭成像缓冲液；全部组分经过联合验证，规避零散试剂搭配的兼容性风险。

🔹多细胞器 + 细胞骨架同步高保真固定：同时保存线粒体、内质网、高尔基体、溶酶体、微管、微丝精细超微细节，降低固定带来结构畸变，满足多靶标超分辨标记。

🔹一体化封闭打孔试剂：一步完成封闭与膜通透；可沿用至一抗二抗孵育，持续压低非特异背景，提高胞内大分子抗体穿透效率；搭配制样伴侣显著降低昂贵抗体消耗量。

🔹多设备兼容：STED、SIM、转盘共聚焦、普通共聚焦、宽场荧光；支持 2D 平面、3D Z‑stack 多层堆栈成像。

🔹sufficient for 60‑120 samples，可满足批量贴壁细胞玻底皿、细胞爬片超分辨制样。