足突结构的 STED 成像推荐产品
Podocyte Foot Process · STED Super-Resolution Imaging · 荧光探针与高保真样品制备方案
肾小球足突（podocyte foot process）富含微丝，富含裂孔隔膜蛋白，nephrin、Podocin、NEPH1 和 CD2AP 等。围绕足突结构的 STED 成像，以下从荧光成像和样品质量两个角度给出产品推荐。
一、从荧光成像角度来讲
推荐 abberior 系列的染料和二抗，完全替代掉传统的二抗。这些是为 STED 成像设计的长斯托克斯位移，抗淬灭的光稳定性染料，非常适合 STED 成像。
1、荧光二抗
abberior STAR RED 最常用种属 rabbit / mouse，其它常用种属也都有供应。
- abberior STAR RED, goat anti-rabbit IgG, 500 µl (1 mg/ml) SKU STRED-1002-500UG
- abberior STAR RED, goat anti-mouse IgG, 500 µl (1 mg/ml) SKU STRED-1001-500UG
Organic fluorescent dye conjugated with polyclonal secondary anti-rabbit IgG antibody, host: goat, concentration 1 mg/ml.
成像模态 STED | 波长范围 600-650 nm | Storage: -20°C Size: 500 µl (1 mg/ml)
abberior STAR ORANGE 最常用种属 rabbit / mouse，其它常用种属也都有供应。
- abberior STAR ORANGE, goat anti-rabbit IgG, 500 µl (1 mg/ml) SKU STORANGE-1002-500UG
- abberior STAR ORANGE, goat anti-mouse IgG, 500 µl (1 mg/ml) SKU STORANGE-1001-500UG
Organic fluorescent dye conjugated with polyclonal secondary anti-rabbit IgG antibody, host: goat, concentration 1 mg/ml.
成像模态 STED | 波长范围 550-600 nm | Storage: -20°C Size: 500 µl (1 mg/ml)
abberior STAR 460L 最常用种属 rabbit / mouse。请注意，3 色 STED 不可以用常规的 al488 来做，第三色只能是长斯托克斯位移的 460L。
- abberior STAR 460L, goat anti-rabbit IgG, 500 µl (1 mg/ml) SKU ST460L-1002-500UG
- abberior STAR 460L, goat anti-mouse IgG, 500 µl (1 mg/ml) SKU ST460L-1001-500UG
Organic fluorescent dye conjugated with polyclonal secondary anti-rabbit IgG antibody, host: goat, concentration 1 mg/ml.
成像模态 STED | 波长范围 430-500 nm | Storage: -20°C Size: 500 µl (1 mg/ml)
2、微丝染料
abberior STAR RED, phalloidin，其它波段也都有供应。
- abberior STAR RED, phalloidin, 20 µg SKU STRED-0100-20UG
Fluorescent dye conjugates of phalloidin are used to stain F-actin. The high specificity of phalloidin offers significant advantages over antibodies for actin labeling. Reconstitute the vial in 1.5 mL of DMF or DMSO to obtain a stock solution of 200 units/mL. We recommend diluting this stock solution 1:200 to prepare a staining solution with a final concentration of 1 unit/mL.
成像模态 STED | 波长范围 600-650 nm | 固定细胞染料 | Storage: -20°C Size: 20 µg
3、膜结构染料
abberior STAR RED, membrane，其它波段也都有供应。
- abberior STAR RED, membrane, 5 nmol SKU STRED-0206-5NMOL
Our abberior STAR RED membrane probes can be readily used to specifically label the outer plasma membrane of living cells or can be used for in vitro studies. All our bright and photostable abberior STAR membrane probes are modified by cholesterol as a functional group. Since the dye is not incorporated into the membrane, our unique abberior membrane probes do not change the composition of the plasma membrane by foreign substances. The natural behavior of the membrane and fluidity will maintain. This product contains 1 vial of abberior STAR RED membrane as a lyophilized powder, a stock solution of 10 µM in DMF or DMSO is recommended. Depending on cell type, or tissue a working solution of 10 to 50 nM in aqueous media is advised, which is sufficient for up to 1000 cell stainings.
成像模态 STED | 波长范围 600-650 nm | Storage: -20°C Size: 5 nmol
二、从样品质量的角度上讲
首当其冲的是要提高固定的质量，固定质量决定了靶标的保真程度，是最关键的。实验室常规的固定液级别和纯度不够，容易出现变酸、氧化的现象，有效性降低。如果您有摸索好的固定液浓度，建议避免常规固定液。
1、超分辨光镜级固定液基础成分
- Sunbloss®超分辨光镜级 PFA-16% SKU HXSP012 · 30ml
- Sunbloss®超分辨光镜级 GA-50% SKU HXSP014 · 100ml
Sunbloss®超分辨光镜级 PFA-16%，旨在解决传统固定液保真性不足，难以保存超分辨率成像纳米结构的问题。本产品是固定液中的基础成分，用于特殊浓度固定液的配置，一般推荐不要低于 4%。本产品可用于样品的结构固定，也可以用于样品标记完成后的后固定。
Sunbloss®超分辨光镜级 PFA-16%采用了特殊制备工艺，提高了产品的纯度、活性和稳定性。常规的 PFA 是广泛的通用试剂，适配传统介观成像，如组织和组织切片等。但是在固定细胞方面，常造成细胞质的流失。Sunbloss®超分辨光镜级 PFA-16%的工艺改进，可以使细胞固定后，完好保持活细胞时的形态。
2、细胞器专属固定液
此外，还有细胞器专属的固定液，可以进一步提升固定效果。肾小球足突富含微丝，富含裂孔隔膜蛋白，nephrin、Podocin、NEPH1 和 CD2AP 等。
如果重点研究微丝和微丝附着蛋白，推荐使用高保真固定液-微丝：
- Sunbloss®高保真固定液-微丝 SKU HXSP002 · KIT
高保真固定，旨在解决超分辨率成像保存细胞超微结构的难题，使固定后的细胞尽可能保持活细胞时的原貌。
本试剂盒针对细胞微丝的特性开发，细胞微丝形态多变，具有多重细腻的结构，这些微小结构很容易淹没在背景中。独创的 General Actin Buffer 使 Actin 的标记密度和保真度大大提高，使微丝的点状、丝状、应力纤维等多层次结构完全还原，维持可以和活细胞媲美的微丝结构。用户只需按照本试剂盒的 protocol 和检查点进行细致的操作，可以获得保真性显著提高的固定细胞效果。
靶向细胞器 微丝 | *本试剂盒需要在 37 度的温度下固定，原因是 General Actin Buffer 缓冲液在 37 度时工作最佳。
如果需要研究足突附近的膜结构、细胞质蛋白，兼顾微丝的话，推荐高保真固定液-多细胞器：
- Sunbloss®高保真固定液-多细胞器 SKU HXSP004 · KIT
本试剂盒针对多细胞器的特性开发均衡、兼顾的固定液成分。独创的 General Multiple Organelle Types Buffer，使难以同时保存的膜细胞器和细胞骨架能在固定后高度保真保存。多细胞器固定液，特别适用于内质网、线粒体、溶酶体、高尔基体等膜细胞器与细胞微管、细胞微丝需要同时固定的情形。用户只需按照本试剂盒的 protocol 和检查点进行细致的操作，就可以达到超微结构保存显著提高的效果。
产品类型 高保真固定液 | *本试剂盒需要在 37 度的温度下固定。
3、自发荧光抑制剂
降低样本背景，提升样本信号背景比，推荐：
- Sunbloss®自发荧光抑制剂 SKU HXSP007 · KIT · 37支x5mg
Sunbloss®自发荧光抑制，旨在解决弱信号成像中的背景干扰。在强信号的样本中，也有显著抑制背景，使信号更突出的功效。本底荧光背景有两个来源，一个是细胞内的自发荧光，另一个是醛类固定剂带来的额外的荧光。这些自发荧光在标记荧光前，就存在并干扰后续标记的荧光信号，降低信号背景比。例如，在单分子超分辨成像中，单分子信号本身的强度偏弱，强烈的本底荧光会淹没单分子信号，使得定位失准。
Sunbloss®® AutoFluor Quencher 的工作浓度是 1mg/ml，即，1 支 5mg 的 Quencher powder 可以配置 5ml 的工作液。
足突 STED 成像产品速查表
| 产品 | SKU | 成像模态 | 波长范围 | 靶标 / 规格 |
|---|---|---|---|---|
| abberior STAR RED, goat anti-rabbit IgG | STRED-1002-500UG | STED | 600-650 nm | Rabbit · 500 µl |
| abberior STAR RED, goat anti-mouse IgG | STRED-1001-500UG | STED | 600-650 nm | Mouse · 500 µl |
| abberior STAR ORANGE, goat anti-rabbit IgG | STORANGE-1002-500UG | STED | 550-600 nm | Rabbit · 500 µl |
| abberior STAR ORANGE, goat anti-mouse IgG | STORANGE-1001-500UG | STED | 550-600 nm | Mouse · 500 µl |
| abberior STAR 460L, goat anti-rabbit IgG | ST460L-1002-500UG | STED | 430-500 nm | Rabbit · 500 µl |
| abberior STAR 460L, goat anti-mouse IgG | ST460L-1001-500UG | STED | 430-500 nm | Mouse · 500 µl |
| abberior STAR RED, phalloidin | STRED-0100-20UG | STED | 600-650 nm | F-actin · 20 µg |
| abberior STAR RED, membrane | STRED-0206-5NMOL | STED | 600-650 nm | 细胞膜 · 5 nmol |
| Sunbloss®超分辨光镜级 PFA-16% | HXSP012 | — | — | 固定液基础成分 · 30ml |
| Sunbloss®超分辨光镜级 GA-50% | HXSP014 | — | — | 固定液基础成分 · 100ml |
| Sunbloss®高保真固定液-微丝 | HXSP002 | — | — | 微丝 · KIT |
| Sunbloss®高保真固定液-多细胞器 | HXSP004 | — | — | 多细胞器 · KIT |
| Sunbloss®自发荧光抑制剂 | HXSP007 | — | — | KIT · 37支x5mg |
全套免疫荧光制备教程可在华夏成像官方视频号查看，参考线粒体、微丝的整体标记实操视频。
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