本报告摘要

本报告为 20261009-北京世纪桑尼科技有限公司四色样品-交付报告。样品为 BSCI 细胞四色标准样品，标记结构为微管、线粒体、微丝、细胞核，结果列表按 647 微管、561 线粒体、488 微丝、405 细胞核呈现。报告包含质检设备参数、11 步质检结果、14 步 Protocol、试剂原料留档、原始样本与环境留档、样品实物照片、结果列表和下一步行动。成像结果共覆盖 S01、S02 两个干片样品，各 3 个视野、4 个通道，合计 24 张。S01 为 1.5 号玻片皿，满足细胞密度高的需求，微管连续，四个通道信号都很强，Hoechst 容易串色并已稍微调低；S02 为 1.5 号高平玻片皿，满足细胞密度高的需求，无法判断微管连续性，但四个通道信号都很强，Hoechst 同样容易串色并已稍微调低。两个样品的结果说明均标注“可交付”；报告“下一步行动”为交付 S01、入库 S02。质检总结中，固定后记录为线粒体形态正常、信号亮、背景低，微管形态正常、完整、洁净，微丝聚合程度高、亮度强、背景低；一抗与二抗均记录为有效、高特异性；封片为干片保存。环境与异常记录包括：环境温度 25℃、湿度 30 且备注湿度偏低，无菌水有沉淀，样本曾有局部污染并通过大量 PBS 清洗压制球菌生长。

20261009-北京世纪桑尼科技有限公司四色样品-交付报告

一、质检设备参数

汞灯更换时间：20260508

调正光路时间：20261009

定标品：Standard 干片，高平玻片

202609 Standard的拍摄条件： 640 900ms 561 100ms 488 900ms 405 300ms 只拍摄 561 通道。

滤光片、二向色镜参数

二、质检结果总结

包含步骤、过程、产品、结果。

步骤	过程	产品	结果
1	BSCI 细胞优化至第五代	Sunbloss®细胞高活力培养基AB液	有效，形态好、细胞活力好，密度高
2	全程基础试剂	Sunbloss®超纯制样PBS	有效、洁净
3	固定 BSCI 细胞	Sunbloss®高保真固定液-微管	线粒体形态正常，信号亮，背景低；微管形态正常，完整，洁净；微丝聚合程度高，亮度强，背景低；
4	Quench	Sunbloss®自发荧光抑制	有效，洁净
5	封闭一抗	Sunbloss®封闭打孔液	有效，洁净
6	一级抗体	Sunbloss®️ Imaging-grade anti-E7 Mouse Antibody for Microtubule Sunbloss®️ Imaging-grade anti-Tom20 Rabbit Antibody for Mitochondria	有效，高特异性有效，高特异性
7	封闭二抗	Sunbloss®荧光净化增强液	有效，洁净
8	二级抗体	Goat anti-Rabbit IgG (H+L) Highly Cross-Adsorbed Secondary Antibody, Alexa Fluor™ 647 - A-21245 Goat anti-Mouse IgG (H+L) Highly Cross-Adsorbed Secondary Antibody, Alexa Fluor™ Plus 555 - A32727	有效，高特异性有效，高特异性
9	后固定试剂	Sunbloss®超分辨光镜级 PFA-16%	有效，洁净
10	封片前用水	无菌制样用水	新制，洁净
11	封片	干片保存

三、Protocol

总结样本最终成功标记的 Protocol，从细胞开始描述，记述完整的标记过程。使用 sunbloss 系列产品的，略写，附说明书；使用额外步骤的，详写。

微管、线粒体、微丝、细胞核四色样本

复苏BSCI细胞，优化到第五代；
应用 Sunbloss®高保真固定液-微管固定线粒体样本，37℃，10 min；
使用Sunbloss®️超纯制样PBS清洗细胞 3 次。
使用 Sunbloss®️自发荧光抑制剂，对细胞进行quenching，25℃，7 min；
使用Sunbloss®️超纯制样PBS清洗细胞 3 次。
使用 Sunbloss®️封闭打孔液，同时实现封闭和打孔，25℃，30min；
「一抗孵育」使用 Sunbloss®️制样伴侣-贴壁样本，孵育tubulin（HX-AYS06）和tom20（HX-AYS05）一抗，25℃，36 h；
使用Sunbloss®️超纯制样PBS清洗一抗，5min 一次，清洗三次；
「二抗孵育」使用 Sunbloss®️制样伴侣-贴壁样本，孵育alexa647、alexa555、acti-stain 488、hoechest，37℃，6 h
使用Sunbloss®️超纯制样PBS清洗二抗，5min 一次，清洗三次；
使用 Sunbloss®️超分辨光镜级PFA-16%，预制成 4%浓度的 PFA后，对样品进行后固定，25℃，10 min。
使用Sunbloss®️超纯制样PBS清洗细胞 3 次。随后用无菌水清洗样品 3 次。
样品阴干，干燥避光，4 h；
成像。

四、试剂原料留档

材料照片含：一抗，二抗，染料，总图片，试剂侧面图片；

第一张图：要拍出来试剂架上的文字，表明确实用到了报告中的物料；

第二张图：拍到厂家的货号批号；

下表包含各个染料和抗体的名称、储存方式、储液浓度、储液溶剂、工作液浓度、工作液溶剂，异常情况备注等。

原料储液浓度&工作浓度表	名称	储存方式	储液浓度	储液溶剂	工作液浓度	工作液溶剂	异常情况备注
一级抗体1	Sunbloss®️ Imaging-grade anti-E7 Mouse Antibody for Microtubule	-20℃	0.1 mg/ml	GL 无菌水	12μg/ml	Sunbloss®封闭打孔液
一级抗体3	Sunbloss®️ Imaging-grade anti-Tom20 Rabbit Antibody for Mitochondria	-20℃	0.5mg/ml	PBS，含50%甘油和0.05% BSA，以Proclin300或叠氮化钠防腐，pH 7.3。	20μg/ml	Sunbloss®封闭打孔液
二级抗体1	Goat anti-Rabbit IgG (H+L) Highly Cross-Adsorbed Secondary Antibody, Alexa Fluor™ 647 - A-21245	-20℃	0.67mg/ml	含有甘油 PBS, pH 7.5 5mM sodium azide	21.6μg/ml 实际是此数值的 2 倍	Sunbloss®封闭打孔液	2:30
二级抗体2	Goat anti-Mouse IgG (H+L) Highly Cross-Adsorbed Secondary Antibody, Alexa Fluor™ Plus 555 - A32727	-20℃	0.67mg/ml	含有甘油 PBS, pH 7.5 0.016% Methylisothiazolone, 0.016% Bromonitrodioxane	21.6μg/ml 实际是此数值的 2 倍	Sunbloss®封闭打孔液	2:30
染料 1	cytoskeleton acti-stain 488 phallodin	-20℃	14μM	DMSO	451.6nM 实际是此数值的 2 倍	Sunbloss®封闭打孔液	3:30
染料 2	Hoechest 33342	-20℃	5mg/ml	含有甘油	50μg/ml	Sunbloss®封闭打孔液	1:100

五、原始样本留档

	说明	异常情况备注
样本类型	细胞
样本名称	BSCI
样本数量	2
样本来源	华夏成像细胞种子库
样本代数（细胞）样本新鲜度（液体样本）储存时间（动植物组织）	6代	有局部污染，通过大量 PBS 清洗压制球菌生长
样本前处理操作

六、制样环境条件留档：

参考温度湿度计记录环境温度、湿度；工作液温度、洁净度；

	说明	异常情况备注
环境温度	25℃
环境湿度	30	湿度偏低
PBS的洁净度	无肉眼可见污染
一抗孵育温度	25 ℃
二抗染料孵育温度	37℃
第三轮二抗和染料孵育温度（如有）	无
其他工作液温度	25 ℃	高于 25 度
其它工作液洁净度	基本洁净	无菌水有沉淀