本报告摘要
本报告为 20261008-苏州瑞霏-双色 STED 细胞样品-交付报告。样品为 BSCI 细胞双色标准样品，标记结构为微管、线粒体，结果按 647 微管、561 线粒体 呈现。报告包含质检设备参数、11 步质检结果、14 步 Protocol、4 种抗体浓度表、原始样本留档、制样环境条件留档、样品实物照片、结果列表与下一步行动。成像结果共覆盖 S01、S02 两个样品，各 3 个视野、2 个通道，合计 12 张。S01 为 1.5 号方形高平玻片样品，STAR red E7 微弱、STAR Orange Tom20 特别亮，串色到了 E7，不可交付；S02 为 1.5 号圆形高平玻片样品，STAR red E7 较弱、STAR Orange Tom20 特别亮，略微串色到了 E7，整体在可控范围内，可交付。质检总结中，固定后记录为线粒体形态正常、信号亮、背景低，微管形态正常、完整、洁净，微丝聚合程度高、亮度强、背景低；一抗与二抗均记录为有效、高特异性；封片为干片保存。环境与异常记录包括：环境温度 25℃、湿度 30 且备注湿度偏低，无菌水有沉淀，样本曾有局部污染并通过大量 PBS 清洗压制球菌生长。
20261008-苏州瑞霏-双色 STED细胞样品-交付报告
一、质检设备参数
汞灯更换时间：20260508
调正光路时间：20261008
定标品：定标品干片，高平玻片
202609 定标品的拍摄条件： 640 900ms 561 100ms 488 900ms 405 300ms 只拍摄 561 通道。
滤光片、二向色镜参数
二、质检结果总结
包含步骤、过程、产品、结果。
| 步骤 | 过程 | 产品 | 结果 |
|---|---|---|---|
| 1 | BSCI 细胞优化至第五代 | Sunbloss®细胞高活力培养基AB液 | 有效，形态好、细胞活力好，密度高 |
| 2 | 全程基础试剂 | Sunbloss®超纯制样PBS | 有效、洁净 |
| 3 | 固定 BSCI 细胞 | Sunbloss®高保真固定液-微管 | 线粒体形态正常，信号亮，背景低； 微管形态正常，完整，洁净； 微丝聚合程度高，亮度强，背景低； |
| 4 | Quench | Sunbloss®自发荧光抑制 | 有效，洁净 |
| 5 | 封闭一抗 | Sunbloss®封闭打孔液 | 有效，洁净 |
| 6 | 一级抗体 | Sunbloss®️ Imaging-grade anti-E7 Mouse Antibody for Microtubule Sunbloss®️ Imaging-grade anti-Tom20 Rabbit Antibody for Mitochondria | 有效，高特异性 有效，高特异性 |
| 7 | 封闭二抗 | Sunbloss®荧光净化增强液 | 有效，洁净 |
| 8 | 二级抗体 | abberior STAR RED, goat anti-mouse IgG abberior STAR Orange, goat anti-rabbit IgG | 有效，高特异性 有效，高特异性 |
| 9 | 后固定试剂 | Sunbloss®超分辨光镜级 PFA-16% | 有效，洁净 |
| 10 | 封片前用水 | 无菌制样用水 | 新制，洁净 |
| 11 | 封片 | 干片保存 |
三、Protocol
总结样本最终成功标记的 Protocol，从细胞开始描述，记述完整的标记过程。使用 sunbloss 系列产品的，略写，附说明书；使用额外步骤的，详写。
线粒体、微管双色样本
- 复苏BSCI细胞，优化到第五代；
- 应用 Sunbloss®高保真固定液-膜细胞器固定线粒体样本，37℃，10 min；
- 使用Sunbloss®️超纯制样PBS清洗细胞 3 次。
- 使用 Sunbloss®️自发荧光抑制剂，对细胞进行quenching，25℃，7 min；
- 使用Sunbloss®️超纯制样PBS清洗细胞 3 次。
- 使用 Sunbloss®️封闭打孔液，同时实现封闭和打孔，25℃，30min；
- 「一抗孵育」使用 Sunbloss®️制样伴侣-贴壁样本，孵育tubulin（HX-AYS06）和tom20（HX-AYS05）一抗，25℃，36 h；
- 使用Sunbloss®️超纯制样PBS清洗一抗，5min 一次，清洗三次；
- 「二抗孵育」使用 Sunbloss®️制样伴侣-贴壁样本，孵育STAR Red，STAR Orange，37℃，6 h
- 使用Sunbloss®️超纯制样PBS清洗二抗，5min 一次，清洗三次；
- 使用 Sunbloss®️超分辨光镜级PFA-16%， 预制成 4%浓度的 PFA后，对样品进行后固定，25℃，10 min。
- 使用Sunbloss®️超纯制样PBS清洗细胞 3 次。随后用无菌水清洗样品 3 次。
- 样品阴干，干燥避光。样品封片，使用 abberior solid mount 封片剂；
- 成像。
四、 试剂原料留档
材料照片含：一抗，二抗，染料，总图片，试剂侧面图片；
第一张图：要拍出来试剂架上的文字，表明确实用到了报告中的物料；
第二张图：拍到厂家的货号批号；
下表包含各个染料和抗体的名称、储存方式、储液浓度、储液溶剂、工作液浓度、工作液溶剂，异常情况备注等。
| 原料储液浓度&工作浓度表 | 名称 | 储存方式 | 储液浓度 | 储液溶剂 | 工作液浓度 | 工作液溶剂 | 异常情况备注 |
|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 一级抗体1 | Sunbloss®️ Imaging-grade anti-E7 Mouse Antibody for Microtubule |
-20℃ | 0.1 mg/ml |
GL 无菌水 | 12μg/ml |
Sunbloss®封闭打孔液 | |
| 一级抗体2 | Sunbloss®️ Imaging-grade anti-Tom20 Rabbit Antibody for Mitochondria | -20℃ | 0.5mg/ml | PBS，含50%甘油和0.05% BSA，以Proclin300或叠氮化钠防腐，pH 7.3。 | 20μg/ml | Sunbloss®封闭打孔液 | |
| 二级抗体2 | abberior STAR RED, goat anti-mouse IgG | -20℃ | 0.33mg/ml | 含有甘油 | 39.6μg/ml 实际 是此数值的 2 倍 |
Sunbloss®封闭打孔液 | 2:30 |
| 二级抗体3 | abberior STAR Orange, goat anti-rabbit | -20℃ | 0.33mg/ml | 含有甘油 | 39.6μg/ml 实际 是此数值的 2 倍 |
Sunbloss®封闭打孔液 | 2:30 |
五、 原始样本留档
| 说明 | 异常情况备注 | |
|---|---|---|
| 样本类型 | 细胞 | |
| 样本名称 | BSCI | |
| 样本数量 | 2 | |
| 样本来源 | 华夏成像细胞种子库 | |
| 样本代数（细胞） 样本新鲜度（液体样本） 储存时间（动植物组织） | 6代 | 有局部污染，通过大量 PBS 清洗压制球菌生长 |
| 样本前处理操作 |
六、 制样环境条件留档：
参考温度湿度计记录环境温度、湿度；工作液温度、洁净度；
| 说明 | 异常情况备注 | |
|---|---|---|
| 环境温度 | 25℃ | |
| 环境湿度 | 30 | 湿度偏低 |
| PBS的洁净度 | 无肉眼可见污染 | |
| 一抗孵育温度 | 25 ℃ | |
| 二抗染料孵育温度 | 37℃ | |
| 第三轮二抗和染料孵育温度（如有） | 无 | |
| 其他工作液温度 | 25 ℃ | 高于 25 度 |
| 其它工作液洁净度 | 基本洁净 | 无菌水有沉淀 |
七、样品实物照片
包含完整样品标记、编号，标签等
下半部分是本报告涉及的样品
| 结构 | 染料 | 波长 Abs(nm)-Em(nm) | |
|---|---|---|---|
| 1 | 微管 | Abberior STAR Red | 638-655 |
| 2 | 线粒体 | Abberior STAR Orange | 555-565 |
八、结果列表
截图列表，需带有拍摄参数、灰度值、样本名称等。内容含样品编号，标签信息、明场检查点分流标签、一抗名称、二抗名称、染料名称、封片剂（如有注明类型）或干片；通道如下保存：BF、647、561、488、405、原始数据
| 视野 | 647微管 | 561线粒体 |
|---|---|---|
| 1 |  |
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| 2 |  |
 |
| 3 |  |
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| 视野 | 647微管 | 561线粒体 |
|---|---|---|
| 1 |  |
 |
| 2 |  |
 |
| 3 |  |
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九、下一步行动
交付样品 S02，入库样品S01
盘查细胞出现异常串色的原因。