1、细胞是在活着的时候接受抽提的,因此,接触细胞的所有的试剂,请维持37℃!37℃!37℃!
(预热试剂,建议提前准备好预热的预混好的抽提液、预热的 PBS、预热的固定液,因为这三个步骤通常是连续操作)
2、确保抽提液已经预热到 37 度;
3、吸去细胞培养基,尽可能快的加入抽提液。(如果能确保操作时的温度和操作速度,可以使用预热的 PBS 清洗 2 次,效果更好。但是,新手建议不做清洗,原因是步骤增加,如果产生温度波动和时间延迟,会造成细胞皱缩。)
每个成像玻底皿不少于 350ul,孵育时间根据实验目的不同而不同:
抽提时间相对短暂: 细胞固定之前,抽提的时间为5s-90s不等
3.1 细胞微管:5s-10s
3.2 细胞核:30s-60s
3.3 膜细胞器:不建议做抽提
3.4 细胞微丝:不建议做抽提
4、吸去抽提液,加入预热的细胞固定液进行固定,依然维持在 37 度固定,直到细胞被完全固定;(如果能确保操作时的温度和操作速度,可以使用预热的 PBS 清洗 2 次,洁净效果更好。但是,新手建议不做清洗,原因是步骤增加,如果产生温度波动和时间延迟,会造成细胞细胞质流失过多。)
5、PBS 清洗三次,进行下面的染色步骤
华夏成像抽提液 Extraction Buffer
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