Donkey anti-Mouse IgG (H+L) Highly Cross-Adsorbed Secondary Antibody, Alexa Fluor™ 488
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为了尽量减少交叉反应性，这些驴抗小鼠 IgG 全抗体经过亲和纯化，对牛、鸡、山羊、豚鼠、仓鼠、马、人、小鼠、大鼠和绵羊血清蛋白的交叉反应性最小。交叉吸附或预吸附是一种纯化步骤，可提高抗体的特异性，从而提高灵敏度并减少背景染色。二抗溶液通过含有来自潜在交叉反应物质的固定化血清蛋白的柱基质。色谱柱中仅捕获非特异性结合的二抗，高度特异性的二抗流经。在与其他一抗存在潜在交叉反应性的多重/多色染色实验（例如，流式细胞术）中，或在可能存在内源性免疫球蛋白的组织/细胞荧光染色实验中，这一额外步骤的好处是显而易见的。
 
Alexa Fluor 染料是当今最值得信赖的荧光染料之一。Invitrogen™ Alexa Fluor 488 染料是一种明亮的绿色荧光染料，具有激发功能，非常适合 488 nm 激光线。为了在成像和流式细胞术中稳定地生成信号，Alexa Fluor 488 染料在较宽的摩尔范围内对 pH 值不敏感。具有高荧光量子产率和高光稳定性的探针可以高灵敏度检测低丰度的生物结构。Alexa Fluor 488 染料分子可以以高摩尔比附着在蛋白质上，而不会产生明显的自淬灭，从而实现更明亮的偶联物和更灵敏的检测。每个偶联物的标记程度通常为每个 IgG 分子 2-8 个荧光团分子;每个产品批次的分析证书上都标明了确切的标签程度。
 
使用偶联溶液：使用前在微量离心机中短暂离心蛋白质偶联溶液;仅将上清液加入实验中。此步骤将有助于消除在储存过程中可能形成的任何蛋白质聚集体，从而减少非特异性背景染色。由于染色方案因应用而异，因此应根据经验确定抗体的适当稀释度。对于荧光基团标记的抗体，对于大多数免疫组化和流式细胞术应用，1-10 μg/mL 的终浓度应令人满意。