贴心指南：如何利用华夏成像质检报告玩转成像？

零、质检中的最佳成像

在这个部分，您可以看到经过成像参数优化后得到的最佳成像。

一、质检原料留档

在这个部分，您可以看到质量检测过程中真实原料记录，真实制样条件等，这非常重要。

二、质检成像参数

在这个部分，您可以成像检测设备、样本载体的基础光学参数，这将引导您对样本的最终呈现出来的质量产生直接的印象。

华夏成像Standard Imaging系列标准样品质检报告均由EVIDENT FV3000共聚焦显微镜设备完成。

三、质检结果

在这个部分，您可以双击查看大图，对截图的左侧含有成像参数、样本的灰度值分布。结合设备基础参数、正对照、样本的结构完整性、信号背景比等的展现，您可以多维度的了解该原料可以胜任的最好的荧光样本的质量。

四、使用说明

在这个部分，您可以获得做不同下游成像时，所采取的不同标记策略，以最大化性价比。必要时进入原厂链接，或许更详细的试剂数据。

4.1包装说明

4.2 超分辨率时代荧光标记的Protocol

——以细胞为例

在这个部分，您可以获得细致入微的超分辨成像级protocol。

1. 用上皮细胞制备样品，成像时细胞密度约为50%-70%。

*培养出超分辨级别上皮细胞的技巧值得专门推出一篇技术文章讲解，敬请关注成像翰林院进一步更新哦

*对于悬浮细胞、细菌和较厚样品的制备技巧值得专门推出专题文章讲解，敬请关注成像翰林院进一步更新哦

2. 用固定液固定，需要好准备预热到37度的PBS和固定液。建议在细胞间内操作。如果不允许，可以把细胞拿到合适的房间，用预热的PBS简短的清洗细胞2次。用手轻轻地摇晃细胞，小心地添加或移除PBS。加入固定液后，25度，10min。

*需格外关注温度，室温在昼夜和不同季节都会偏离25度，必要时需要恒温箱准确的保障25度。

*固定液对细胞的影响非常大，必要时请选择Standard imaging 验证过的超分辨级固定液。

3. 用Quenchi缓冲液处理样品，在摇床上辅助工作液交换，25度，5min～7 min。

*Quench试剂很容易失效，必要时请选择Standard imaging 验证过的超分辨级quench试剂。

4. 用1xPBS简短的清洗2次，25度。

5. 用封闭+打孔缓冲液孵育，25度，30 min；

*这一步可以选择300 ul-500 ul填满整个玻璃皿底，或50ul并借助Standard 制样伴侣小贴膜均匀的铺在皿底；

*封闭打孔试剂是非特异性背景是否干净的关键，必要时请选择Standard imaging 验证过的封闭打孔液；

*对于细胞深层的非膜结构，可以选择先打孔再封闭

6. 用特定的一抗工作液，在每个玻底培养皿或玻片上滴加保证覆盖细胞的工作液体积，25度，60分钟。

*延长标记时间可能提高标记密度，但也有可能造成更高的背景，尤其是对特异性差的抗体；

*可以选择300 ul-500ul填满整个玻璃皿底，或25 ul-30 ul并借助Standard 制样伴侣小贴膜均匀的铺在皿底；

*抗体出厂浓度差异较大，浓度与超分辨率成像的适配性需要仔细检查；

*抗体的批次一致性，运输、存储过程造成的损失大于其他试剂，对抗体进行滴定经常是必要的；

*抗体在超分辨率尺度下的robustness表现较差，必要时请选择Standard imaging验证过的抗体；

7. 用PBS缓冲液洗涤细胞3次，每次5分钟，在摇床上辅助缓冲液交换。

8. 用特定的二抗工作液，在每个玻底培养皿或玻片上滴加保证覆盖细胞的工作液体积，25度，60分钟。

*延长标记时间可能提高标记密度，但也有可能造成更高的背景，尤其是对特异性差的抗体；

*可以选择300 ul-500 ul填满整个玻璃皿底，或25 ul-30 ul并借助Standard 制样伴侣小贴膜均匀的铺在皿底；

*抗体出厂浓度差异较大，浓度与超分辨率成像的适配性需要仔细检查；

*抗体的批次一致性，运输、存储过程造成的损失大于其他试剂，对抗体进行滴定经常是必要的；

*抗体在超分辨率尺度下的robustness表现较差，必要时请选择Standard imaging验证过的抗体；

*染料在超分辨率尺度下的robustness表现较差，必要时请选择Standard imaging验证过的染料；

9. 用PBS缓冲液洗涤细胞3次，每次5分钟，在摇床上辅助缓冲液交换。

10. 后固定，固定液4% PFA，25度，10min；

*固定液是很容易吸水失效的，必要时请选择Standard imaging 验证过的固定液。

11. 用1x PBS简短清洗细胞2次。用手轻轻摇动玻底皿。

12. 样品保存，用无菌水洗涤细胞3-5次，完全置换先前的缓冲液。吸去所有的无菌水，阴干4小时以上，待样品完全风干，缠上封口膜，放在-20度中保存。

13. 成像（成像前用成像缓冲液代替PBS）。

*对于SIM/STED/Confocal成像，缓冲液是非必要的。但对易淬灭结构，成像缓冲液有显著的抗淬灭效果。

*对于SMLM成像，缓冲液是必要的。

*缓冲液是易失效的试剂，必要时请选择Standard imaging 验证过的成像缓冲液。

为无限贴近超分辨级样品制备精益求精的标记需要，Standard Imaging Team-华夏成像公司，力求将成像制样每个环节的试剂，都经过SOP流程验证。

对于染料和蛋白类原料极易出现的批次质量波动问题，也在Standard imaging成像实验室被严格筛选

Standard imaging 非常关心样品标记的质量，我们严于律已，只为让超分辨率成像更容易。

必要时，请联系Standard Imaging获取验证过的批次可靠样品制备试剂。

注：每一批验证的试剂可能来自不同的厂家，我们注重成像的结果而非原料厂家的品牌影响力

在Standard imaging，批号重于货号

经过Standard imaging测试的试剂，质量问题由Standard imaging负责，而非原厂家负责

4.3 使用制样伴侣让高质量标记更容易

贴合制样伴侣和揭开制样伴侣：请注意尽量垂直不要划伤细胞：）

五、互动评论区

在这个不分，您可以和我们互动，评价本质量报告，要求更多环节试剂、要求获取更多检测报告等。

本报告的负责人为：@可爱的小象

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