本期直播华夏成像有幸受到知名企业EVIDENT的邀请，共同为广大科研用户分享他们的经验，将样品的标准化和成像端设备前后呼应，为科研流程加油助力，同时也将把现场观众的一些提问回复大家。
文章来源于EVIDENT生命科学 ，作者EVIDENT生命科学
--报告1：国际成像技术标准化的进展和瓶颈
--报告2：共聚焦成像技术的不可替代性
--报告3：什么是样本前端质量控制？
--报告4：微观—宏观样本的质量控制
--问答区--
问：商用血清如何做QC？
答：商用的血清做QC非常困难，血清是动物制品，最好的血源也会出现批次差异，推荐使用无血清培养基，或者使用经过可靠机构做过质控的血清。
问：请问切片贴在载玻片上，再加盖盖玻片的情况下，样品与盖玻片之间的距离问题，多大程度上能通过优化焦平面来解决？
答：样品与盖玻片之间的距离，在高倍物镜下影响大，比如用100X物镜，工作距离可能只有100-200um，结合组织片的厚度，和封片介质的用量估计，可以大概推断下厚度是不是超过了物镜可工作的距离范围。当使用低倍物镜的时候，由于工作距离长，有时候并不太受这个问题的影响，可以成功聚焦样本。
问：用冷的无水乙醇固定会不会影响小一点？
答：冷的乙醇固定液对细胞骨架有一定的固定作用，但是会导致膜的溶解。如果只需要标记骨架，是一个可行的选择。我们常用的固定液配比是PFA和GA，但是级别要求高，需要是做电镜级别的。如果只做骨架，我们会用4%PFA，如果只做膜，我们会用2.5%GA。如果做膜和骨架双色，那就看更看重谁，相应调整混合液的比例。
问：请问老师，现在我在做一个肝叶的全组织透明化染色，对照组和实验组肝页的大小不一样，抗体染色的时候，怎么决定抗体的用量，剂量怎么选择？
答：不同的组织荧光成像结果对比，可能需要估算组织的体积（如称重，密度不均匀的话，可以放水里看液面的增加估算体积等），按照体积制定抗体使用比例。全组织染色实验成本较高，比较建议先使用简单的细胞样本或者切片，检查抗体的质量，当细胞或切片能成功染色，就可以进行一个简单的浓度滴定，浓度梯度最高的那个浓度推荐按照抗体供应商建议浓度的10倍设置，然后梯度降低。看最后的结果，选择一个亮度不减弱的情况下浓度最低的，用测出来的浓度，配置足够的抗体溶液浸没组织标记。
问：怎么控制保真，拍摄线粒体呢？因为我们是需要做病理状态下观察，细胞的状态本身就会有变化。
答：如果您是做人源的病理样本，由于取样过程比较确定，通常很难做样本的质量控制。如果您做的是实验动物的切片的话，还是存在很多优化空间的，比如您可以找专业的机构进行高保真的冰冻切片，冰冻切片的效果在我们的很多结果中都比石蜡切片效果更好，如果您观察切片中的线粒体，石蜡切片工艺应该是会破坏线粒体脂质膜，做高分辨率成像的时候，通常我们建议选择冰冻切片。
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