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Sunbloss®高保真固定液-微管
本试剂盒针对细胞微管的特性开发，独创的General Tubulin Buffer，使得对微环境敏感、易解聚的细胞微管骨架能在固定后高度保真保存。适用于多种贴壁细胞、悬浮细胞的微管固定。使用本试剂盒固定的微管样品，可匹配单分子定位超分辨率成像（SMLM）。用户只需按照本试剂盒的protocol和检查点进行细致的操作，就可以达到超微结构保存显著提高的效果。
| 规格 | 库存 | 价格 | 数量 | 操作 |
|---|---|---|---|---|
| KIT |
有货 |
-23% |
| 名称 | 库存 | 价格 | 数量 | 操作 |
|---|---|---|---|---|
| Sunbloss®高保真固定液-微管 |
有货 |
-23% |
| 规格 | 库存 | 价格 | 数量 | 操作 |
|---|---|---|---|---|
| KIT |
有货 |
-23% |
概述
Sunbloss® High-Fidelity Fixation Kit for Cell Microtubule
CAT:HXSP001
Product Specifications and Storage Methods:
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名称
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规格
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数量
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储存
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|---|---|---|---|---|
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1
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Cell Microtubule Fixation Solution I
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5ml
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3 bottles
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4度储存，密封，干燥
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2
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Cell Microtubule Fixation Solution II
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0.04ml
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3 bottles
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3
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General Tubulin Buffer
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5ml
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3 bottles
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1、产品功能
高保真固定，旨在解决超分辨率成像保存细胞超微结构的难题，使固定后的细胞尽可能保持活细胞时的原貌。
本试剂盒针对细胞微管的特性开发，独创的General Tubulin Buffer，使得对微环境敏感、易解聚的细胞微管骨架能在固定后高度保真保存。适用于多种贴壁细胞、悬浮细胞的微管固定。使用本试剂盒固定的微管样品，可匹配单分子定位超分辨率成像（SMLM）。用户只需按照本试剂盒的protocol和检查点进行细致的操作，就可以达到超微结构保存显著提高的效果。
*本试剂盒需要在 37 度的温度下固定，原因是General Tubulin Buffer缓冲液在 37 度时工作最佳。
*细胞器的保真固定和标记，也依赖于更前端的细胞的状态以及后续的标记物质量。当您发现固定后的染色结果不理想，请审查前端细胞和后端试剂是否达到了要求。当出现这种情形，推荐您获取华夏成像的成像级细胞培养技术支持和标记试剂盒。
2、产品使用Protocol
2.1 试剂配置
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成分
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成分1
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成分2
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成分 3
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用量
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500μl
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4μl
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500μl
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操作
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吸取500μl成分1 + 4μl成分2 + 500μl成分3，加入EP管中，混匀
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*为了使试剂盒发挥最好的效果，请在固定前新鲜配置。
*建议一次固定不超过3皿，避免操作延迟时间太长造成固定效果的减损。
*建议对未使用完的瓶装试剂进行分装，建议分装后储存在密封性强的盒子里，并且添加干燥包以保持干燥。
2.2 对试剂进行37℃预热
预热足量的Sunbloss®️超纯制样PBSS缓冲液，预热预混好的固定液，保证所需试剂都达到 37 度后，才可以开始固定。
2.3 固定液的用量规划
固定液要完全浸没待固定的细胞样本。当固定玻底直径为 2.0cm 的共聚焦成像小皿中的细胞时，固定液可加入中间的凹坑中，固定液用量大于等于300μl即可。当固定 12孔板中的细胞爬片时，固定液用量需要大于等于 1ml。对于细胞爬片，则需要依据载具的孔径调节用量，保证固定液完全浸没爬片。
配置好的固定液是 1ml，每一只预混好的固定液可以用来固定多个皿或者细胞爬片。
2.4 PBS润洗(速度要快，避免干片)
1. 取出成像小皿，放置在显微镜处观察，汇合密度在50%-70%且细胞状态良好
2. 将Sunbloss®️超纯制样PBS沿侧壁加入润洗两次(1ml/次)，第二次清洗后尽量吸干，以免稀释固定液浓度。
*请注意吸干后需要快速进行下一步操作，请勿干片。
2.5 加固定液(覆盖细胞爬片或成像皿底即可)
1. 滴加固定液在细胞爬片上或成像皿底。
2. 维持固定温度37 度，直到固定结束，固定需要10min。
*可以将细胞置于培养箱内或者金属浴上，确保固定过程的温度维持 37 度。
2.6 PBS润洗
固定完成后的细胞，加入 25℃的Sunbloss®️超纯制样PBS溶液润洗3 次。
接下来，可以进入后续的标记步骤。
2.7 观察固定后的细胞状态
我们强烈建议您对固定后的细胞进行明场检查，了解细胞密度，细胞状态，细胞是否有明显的皱缩等情况。
固定后皱缩和结构破坏明显细胞将不能用于后期染色，如果出现了这样的情况，终止染色，避免进一步的浪费。我们建议及时检查前端的细胞状态是否达到了要求，并严格杜绝污染。如果锁定为前端细胞状态的问题，推荐您获取华夏成像的成像级细胞培养技术支持。
关键点
1. 注意在清洗细胞时不要吹打冲击细胞表面，避免细胞形变或者脱落，需要沿侧壁加入。
2. 注意全过程不要使细胞表面过分干燥，这会导致细胞形态变化。
3. 坚持润洗，换液过程中留少许上一步骤的液体作为缓冲，避免影响细胞的渗透压。
4. 大部分状态不好的细胞不能产生良好的制样效果。固定后皱缩明显的细胞，不建议用于后期染色，及时停止在固定步骤，检查前端细胞的问题。
3、 产品优势
细胞微管有对微环境敏感，易解聚的特点。
如果使用了不恰当的固定液和免疫荧光试剂组合，将会失去高保真的标记效果。例如，使用同款微管抗体，在其他品牌固定液+免疫荧光试剂处理下得到的结果：
使用其他品牌固定液和华夏成像 Sunbloss™固定液相比，均存在不同程度的结构解聚或形态改变。
展示图信息：细胞微管结构的 2D成像，画幅大小为 91 微米。四张展示图使用完全一样的微管标记物，仅在固定液+免疫荧光试剂组合的使用上有区别。